|
 |
结核分支杆菌的噬菌体扩增快速检测技术 |
| 来源： 作者： 发布时间：2008-03-03 |
 |
 |
| |
|
| |
自1947年第一个分枝杆菌噬菌体被分离至今，已发现250多种。近年来分枝杆菌噬菌体在结核病实验室研究中取得了很大进展，其中最引人注目的是噬菌体快速扩增技术在TB菌检测及其耐药性测定方面的应用。该方法利用一种特异性噬菌体先后感染MTB和敏感细胞，并通过噬菌斑数量确定标本中MTB复合群的存在状况。FASTPlaqueTB?结核分枝杆菌快速检测试剂盒是该技术唯一的商业化产品。
1、实验原理
先以特异性噬菌体迅速感染、裂解患者标本（如包括痰液、尿、脑脊液、胸水、腹水等）中的结核分枝杆菌，再用高度特异的杀病毒剂清除所有未感染MTB的噬菌体，而进入MTB细胞的噬菌体继续扩增，进而裂解细胞，释放噬菌体。裂解释放的噬菌体感染随即添加的敏感细胞，在其胞内增殖并裂解敏感细胞，平皿中出现噬菌斑。如待检标本不含MTB，噬菌体随即被杀病毒剂清除，故加入的敏感细胞不被感染，平皿中无噬菌斑出现。
2、 试剂盒包装及组成
每个试剂盒含10个测试所需全部试剂，每个包装内含5个试剂盒，即50 个测试所需的全部试剂。每个FASTPlaqueTB?试剂盒应包含以下组份：
试剂 A 1（袋）FPTB 培养基
试剂 B 1（瓶）FPTB 生长补充剂
试剂C*
试剂 D 1（瓶）冻干Actiphage噬菌体
试剂 E 1（瓶）冻干敏感细胞
试剂 F 1（瓶）杀病毒剂
试剂 G 1（袋）FPTB 琼脂培养基干粉
反应管 10（个）
产品说明书 1（份，英文）
*使用时，在无菌条件下将试剂B加入无菌的试剂A溶液中，制得试剂C（FPTB增强培养基）。
3、试剂盒贮藏条件及有效期
－重制前：
★所有试剂应按相关要求贮藏，有效期2年。
－重制后：
★FPTB增强培养基（试剂C）贮藏于2-8℃，稳定期4周；
★ActiphageTM噬菌体（试剂D）溶液,敏感细胞(试剂E)溶液，杀病毒剂（试剂F）溶液贮藏于2-8℃，稳定期7天；
★FPTB琼脂培养基（试剂G）贮藏于25℃下，稳定期4周。
4、质控设置
每次测试均应设置阴性对照、阳性对照：
?阴性对照：无菌C液，用于检测杀病毒剂VirusolTM的有效性。
?阳性对照：稀释106倍的敏感细胞溶液，用于检测噬菌体ActiphageTM和敏感细胞Sensor cellsTM的有效性。
6、 结果判读：
对于FASTplaqueTBTM质控检测结果，阳性及阴性对照应该在如下范围：
ó 阳性对照 ≥20个噬菌斑
ó 阴性对照 ≤10个噬菌斑
对于FASTplaqueTBTM标本检测，结果应该在如下范围：
ó 阳性结果 ≥20个噬菌斑
ó 阴性结果 ≤19个噬菌斑
7、灵敏性
标本中结核分枝杆菌浓度≥100－300cfu/ml即可检出。
8、噬菌体特异性
试剂盒所采用特异性噬菌体仅对结核分枝杆菌复合群敏感，对其它非结核分枝杆菌、非分枝杆菌均不敏感。
|
|
| |
|
| |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| 热点文章 |
|
|
|
|
|
|
| 推荐文章 |
|
| |
|
|
|
|
| |
|
|
